Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者困难重重缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现肝细胞免疫化学反应到再次出现1HG肾病临床研究病症的的蓬勃发展率在儿童末期就有很好的所述，多个肝细胞免疫化学反应中会性的儿童中会有70%在小鼠转化后10年中会患肾病，而随访15年的儿童这一比例上升到84%。相比较之下，占到临床研究1HG肾病一半以上的HG1HG肾病的发病机制还很难给予充分的研究者。

越来越多的人开始适用依此系统来定义1HG肾病的的蓬勃发展：个体在再次出现多种肝细胞免疫化学反应时离开第1阶段，再次出现血糖出现异常时离开第2阶段，再次出现病症时离开第3阶段。一些多发肝细胞免疫化学反应中会性的个体，在1期和2期，的蓬勃发展较较慢，并蓬勃发展为发病的1HG肾病。我们之前所述了一第一组在首次检测到多种肝细胞免疫化学反应样本后据估计10年无肾病的极较慢的蓬勃发展者，这第一组病患者伤亡人数少，但构造并不完全一致。随后，我们发现肝细胞自身上皮细胞专一性CD8+T细胞膜化学反应在的蓬勃发展加速的病患者中会基本不共存，但在近期发病和曾一度共存的肾病病患者中会很较易检测到。这也许断定，与的蓬勃发展病患者相比较，这些病患者免疫化学反应的缓冲增强。

早期研究者断定，尽管缓冲性T细胞膜(Treg)数量短时间，但肾病病患者共存一些新功能缺陷，其中会包括对IL-2的化学反应意志力提高。此外，肾病病患者中会的震荡CD4+T细胞膜也许对缓冲更具抵抗性，平庸为震荡T细胞膜的抑止移向，自然环境转化成的Treg和体外转化成的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞膜中会IL-2化学反应移向。本研究者的意在是所述了CD4+缓冲性T细胞膜(Treg)在一小群极加速的蓬勃发展者中会的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的平行研究者，在21岁以下确诊的病患者亲属中会核查1HG肾病的危险主因。我们之前所述了曾一度加速的蓬勃发展者的构造，他们保持多重肝细胞免疫化学反应中会性有约10年，但很难再次出现肾病的临床研究病症，较慢性或非进行时性免疫。随后，10名之后保持无肾病并愿意共享大量血液样本的加速的蓬勃发展者划入T和B细胞膜新功能统计分析。在目前的研究者中会，8名较慢的蓬勃发展者(SP第一组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞免疫化学反应中会性。所有的参与者都处于1HG肾病的蓬勃发展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞免疫化学反应对某些上皮细胞的中会性化学反应，然而，一名病患者早已处于2期据估计6年，但很难再次出现临床研究病症，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在野外实验中会样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中会对该诱导进行时了直接评核。分开外周血单个核细胞膜(PBMCs)，转用多参数流式细胞膜练成和T细胞膜抑止实验评核诱导中会Treg的振幅、表HG和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行时无监督聚类统计分析，评核Treg表HG。

结果：与身心健康诱导相比较，来自较慢的蓬勃发展体的潜意识CD4+T细胞膜的监督聚类说明了，激活的潜意识CD4+ Treg振幅上升，与免疫抑制诱导的TNFR涉及蛋白(GITR)隐含上升有关。一名HbA1c升高的病患者与的蓬勃发展加速者和比如说的对照第一组相比较，Treg谱各不相同。新功能统计分析断定，与身心健康诱导相比较，来自加速的蓬勃发展体的Treg酪氨酸的CD4+震荡T细胞膜抑止明显受到破坏。平庸为对震荡CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的抑止上升。

由此可知1 深入的表HG统计分析说明了，CD4+Treg亚HG在较慢的蓬勃发展字段中会上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物隐含鉴定出10个元簇:潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个路由器都是一个坦克部队(100个坦克部队)，大得多的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器第一组一处上色。每个路由器中会的碗由此可知暗示单个标有的隐含级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以说明了基本标有隐含。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成由此可知，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖物。(e-l)相比较之下核素为每个metacluster盒新等分(核素> 0.05%)确切为HD和SP第一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞膜(l)。黄色左上角都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩化验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 适用CITRUS的预测模HG断定，Treg振幅的上升是的蓬勃发展加速的图标。分级制度酪氨酸(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP参与者和比如说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的关联。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的图标性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含进行时分开，精心设计FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及诱导SP 606(黄色)中会CD25+ cd127的振幅摘要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+酪氨酸子集的盒新等分;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含数值制做，箭头突出的簇被辨认为SP和HD字段之间的各不相同。(j)盒新等分说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比较之下核素(比例)。(k)直方由此可知说明了每个簇的表HG(粉红色)和Treg标有相比较之下隐含与历史背景隐含(白色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。历史背景与所有其他簇中会标有的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩化验

由此可知3 与身心健康献血者相比较，的蓬勃发展加速者潜意识treg的GITR上升。每个潜意识CD4+T细胞膜元簇(潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的隐含热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(黄褐色)、所有SP(白色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR隐含串联，说明了直方由此可知(c)和摘要由此可知(d)。Wilcoxon配对标记秩和化验，p< 0.07(黄色)所有诱导包括，p< 0.05(白色)诱导SP 606和比如说的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从分级制度酪氨酸，从所有HD(黄褐色)、所有SP(白色)和SP 606(黄色)串联，说明了直方由此可知(e)和摘要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩化验

由此可知4 来自加速的蓬勃发展的CD4+ treg细胞膜控制震荡CD4+T细胞膜的意志力提高。SP第一组用白色的新线和左上角暗示，HD第一组用黑色的新线和左上角暗示，黄色的新线/左上角暗示诱导sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被标有为CFSE, Treg按观察的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠抑制细胞膜，培育出3天后进行时流式细胞膜练成检测。(a-d)与CD4+转发者相比较之下应的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育出。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。适用中会性对照(激活的响应细胞膜下同treg)计算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 震荡CD4+T细胞膜对加速的蓬勃发展的T细胞膜抑制的抑止更敏感。SP第一组用白色的新线和左上角暗示，HD第一组用黑色的新线和左上角暗示，黄色的新线/左上角暗示诱导sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标有，treg按观察的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠抑制细胞膜，培育出3天后进行时流式细胞膜练成(CD25反染)和细胞膜因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者携手培育出。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE抑止百分率(b)。(c,d) CD25抑止百分率(c)和CD134抑止百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出的正确性是，来自加速的蓬勃发展子的抑制潜意识CD4+Treg在GITR隐含中会给予了适配和丰富，阐释了进一步研究者Treg在1HG肾病风险个体中会的举例来说的必要性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28