Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身HIV到消失1型号心血管疾病药理学副作用的成效率在幼儿时期就有很好的刻画，多个肝细胞自身HIV无症状的幼儿当中有70%在血清转换成后10短期内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一比率降低到84%。相比之下，占药理学1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的发病机制还很难得到充分的深入研究。

愈发多的人开始可用分期系统来定义1型号心血管疾病的成效：母体在消失多种肝细胞自身HIV时进入第1过渡阶段，消失血糖反常时进入第2过渡阶段，消失副作用时进入第3过渡阶段。一些多发肝细胞自身HIV无症状的母体，在1期和2期，成效较比较慢，并发展为发病的1型号心血管疾病。我们早先刻画了一小组在首次扫描到多种肝细胞自身HIV试样后至极多10年无心血管疾病的极比较慢成效者，这小组症状人数极多，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身蛋白质特异性CD8+T细胞核能反应会在成效减比较慢的症状当中也就是说不存在，但在近期发病和值得注意的心血管疾病症状当中很容易扫描到。这可能断定，与成效症状相比，这些症状自身免疫反应会的调节减弱。

后期深入研究断定，尽管调节性T细胞核能(Treg)数量正常，但心血管疾病症状存在一些功能有缺陷，其当中仅限于对IL-2的反应会潜能降低。此外，心血管疾病症状当中的震荡CD4+T细胞核能可能对调节更具抵抗性，乏善可陈为震荡T细胞核能的减缓减慢，自然造成了的Treg和排泄造成了的抑止Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞核能当中IL-2反应会减慢。本深入研究的目的是刻画了CD4+调节性T细胞核能(Treg)在一小群极减比较慢成效者当中的特征，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的纵向深入研究，在21岁以下出院的症状亲属当中检查1型号心血管疾病的致命因素。我们早先刻画了长期减比较慢成效者的特征，他们维持多重肝细胞自身HIV无症状超过10年，但很难消失心血管疾病的药理学副作用，比较慢性或非透过性自身免疫。随后，10名独自维持无心血管疾病并愿意包括大量血液试样的减比较慢成效者纳入T和B细胞核能功能科研人员。在目前的深入研究当中，8名比较慢成效者(SP小组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肝细胞自身HIV无症状。所有的大多数人都所处1型号心血管疾病成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身HIV对某些蛋白质的无症状反应会，然而，一名症状并未所处2期至极多6年，但很难消失药理学副作用，一名症状被病人为心血管疾病，该人会72岁，在挖掘实验试样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据科研人员当中对该ADP透过了单独审计。分离外周血单个核能细胞核能(PBMCs)，采用多参数流式细胞核能精和T细胞核能减缓试验审计ADP当中Treg的kHz、表型号和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和紧接著)透过无监理聚类科研人员，审计Treg表型号。

结果：与保健ADP相比，来自比较慢成效体的潜意识CD4+T细胞核能的监理聚类辨识，激已逝的潜意识CD4+ TregkHz降低，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)表述降低有关。一名HbA1c下降时的症状与成效减比较慢者和匹配的相异小组相比，Treg曲谱有所完全相同。功能科研人员断定，与保健ADP相比，来自减比较慢成效体的Treg介导的CD4+震荡T细胞核能减缓明显受损。乏善可陈为对震荡CD4+T细胞核能CD25和CD134表述的减缓降低。

绘出1 深入的表型号科研人员辨识，CD4+Treg亚型号在比较慢成效队列当中降低。由FlowSOM转换成成的Treg二楼，挤满在来自所有ADP的已逝CD4+CD45RA -细胞核能上。根据标记物表述深入研究出10个元簇:潜意识T细胞核能_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞核能;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞核能;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)可用9个完全相同Treg标记转换成成的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点小组周围上色。每个节点当中的饼绘出透露单个标记的表述最高级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整体标记表述。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转换成成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster箱本站绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞核能(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞核能(l)。黄色红色代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 可用CITRUS的实测属实，TregkHz的降低是成效减比较慢的标志。分级门控(a - f)和葡萄科研人员(g-k)相比较SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞核能上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的民族特色绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述透过分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及ADPSP 606(黄色)当中CD25+ cd127的kHz摘要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的箱本站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度可视，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列两者之间的完全相同。(j)箱本站绘出辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组当中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比率)。(k)直方绘出辨识每个簇的表型号(蓝色)和Treg标记一般来说表述与背景表述(深蓝色);上列，文件系统Treg_3;下面动身，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇当中标记的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

绘出3 与保健献血者相比，成效减比较慢者潜意识treg的GITR降低。每个潜意识CD4+T细胞核能元簇(潜意识T细胞核能_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞核能;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞核能;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述标记的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热绘出(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR表述串联，辨识直方绘出(c)和摘要绘出(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有ADP仅限于，p< 0.05(深蓝色)ADPSP 606和匹配的HD不仅限于在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)串联，辨识直方绘出(e)和摘要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

绘出4 来自减比较慢成效的CD4+ treg细胞核能遏制震荡CD4+T细胞核能的潜能降低。SP小组用深蓝色的本站和红色透露，HD小组用白色的本站和红色透露，黄色的本站/红色透露ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核能透过分选。CD4+CD25−(此番者)被标记为CFSE, Treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞核能，养成3天后透过流式细胞核能精扫描。(a-d)与CD4+此番者一般来说应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE减缓平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓平均值。可用无症状相异(激已逝的响应细胞核能不含treg)计算减缓平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差科研人员。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

绘出5 震荡CD4+T细胞核能对减比较慢成效的T细胞核能已逝化的减缓更恰当。SP小组用深蓝色的本站和红色透露，HD小组用白色的本站和红色透露，黄色的本站/红色透露ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核能透过分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标记，treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞核能，养成3天后透过流式细胞核能精(CD25反染)和细胞核能因子科研人员。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同养成。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE减缓次之(b)。(c,d) CD25减缓次之(c)和CD134减缓次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差科研人员。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自减比较慢成效子的已逝化潜意识CD4+Treg在GITR表述当中得到了扩展和丰富，强调了全面性深入研究Treg在1型号心血管疾病效用母体当中的异质性的前提。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28